基于荧光重组酶聚合酶扩增（RPA）技术的微型巴贝虫快速检测方法的开发与现场评估

为何这种隐秘的蜱寄生虫重要

许多人把蜱咬当作一种恼人的小事，但一些蜱携带微型巴贝虫——一种悄然侵入红细胞的微小寄生虫。在健康人群中它可导致类似流感的症状；在易感人群，尤其是接受输血的患者中，可能危及生命。早期检测这种寄生虫很困难，因为它常以极低的血浓度潜伏。本研究描述了一种新的快速检测方法，旨在快速、准确地识别微型巴贝虫，甚至在先进实验室之外使用，从而帮助保护患者和血液供应。

潜伏在血液中的隐形感染

巴贝虫病是由巴贝虫属寄生虫引起的疾病，已成为包括中国和美国在内若干地区日益关注的问题。蜱将寄生虫从野生或家畜传播给人类，寄生虫在人体内藏于红细胞中。早期症状如发热、乏力和贫血，容易被误诊为疟疾或其他常见感染。由于寄生虫可在极低水平循环，常规血涂片显微镜检查甚至某些分子检测常常漏检早期或轻度感染。这对血站尤为令人担忧，因为表面健康的献血者可能在不知情的情况下通过输血将寄生虫传给受血者。

更快识别寄生虫的方法

研究人员将注意力集中在一种称为重组酶聚合酶扩增（RPA）的技术上，该技术可在恒定且温和的温度下扩增特定DNA片段。与需要精确加热和冷却循环及专用设备的传统PCR不同，RPA可在接近体温的条件下在约20分钟内完成扩增，使其在临床或现场条件下具有很大应用潜力。研究团队设计了针对微型巴贝虫高度保守基因区域18S rRNA的RPA试剂，并仔细筛选和优化引物与探针序列，以确保识别微型巴贝虫而不与疟原虫等相关生物交叉反应。

检测灵敏度、特异性与速度

在构建该检测后，科学家提出了三个关键问题：它能检测到多少的寄生虫DNA？是否会将微型巴贝虫与其他微生物混淆？在真实血样中的表现如何？在实验室条件下，该荧光RPA检测稳定地检测到每微升约1飞克的微型巴贝虫DNA——大致相当于每毫升血液中少量寄生虫——并在39°C、仅20分钟内达到最佳效果。与标准的嵌套PCR方法相比，新检测对纯DNA的灵敏度约高出十倍；在稀释的感染小鼠血样中灵敏度约高出600倍，能够检测到每微升0.046个寄生虫的水平，远低于许多现有临床方法的检测下限。

从小鼠与患者到现实诊所

随后，团队超越了纯化DNA的验证。在受控的小鼠模型中，他们随时间追踪感染情况，并比较了三种方法：传统显微镜、嵌套PCR和新RPA检测。显微镜直到感染后第15天才检测到寄生虫，嵌套PCR在部分动物在第9天变为阳性，而RPA能更早在更多动物中检测到感染，所有小鼠在第12天均呈阳性。该检测还正确识别了两例确诊的人类巴贝虫病病例。最后，研究人员将该检测用于中国河南省119名出现发热和血小板减少的患者，这类症状可由多种蜱媒疾病引起。RPA在21例中检测到微型巴贝虫，而嵌套PCR检测到20例；统计分析显示两种方法高度一致，但RPA额外捕获了一例阳性。研究还发现许多患者同时携带微型巴贝虫和布尼亚病毒，突显合并感染如何使诊断复杂化。

对患者与输血安全的意义

对非专业读者而言，核心信息很明确：这种荧光RPA检测提供了一种快捷、便携且高度灵敏的手段来检测血液中的危险蜱媒寄生虫。通过在显微镜和许多标准检测无法触及的极低寄生虫水平上识别微型巴贝虫，它可以帮助临床医生更早确诊，引导恰当治疗，避免将巴贝虫病误认为疟疾，并在寄生虫威胁血液供应的地区加强筛查。尽管在广泛部署前仍有实际挑战需克服，该研究表明简单、适合现场使用的DNA检测能够在抵御新出现的蜱媒感染方面发挥重要公共卫生作用。

引用: Cai, Y., Yang, H.Y., Qiang, K. et al. Development and field evaluation of a rapid detection method for Babesia microti using fluorescent recombinase polymerase amplification(RPA) technology. Sci Rep 16, 14188 (2026). https://doi.org/10.1038/s41598-026-42288-3

关键词: 巴贝斯虫病, 蜱媒疾病, 输血安全, 快速DNA检测, 微型巴贝虫