Opracowanie i ocena w terenie szybkiej metody wykrywania Babesia microti z wykorzystaniem fluorescencyjnej technologii amplifikacji z udziałem rekombinazy (RPA)

Dlaczego ukryty pasożyt kleszczy ma znaczenie

Wielu ludzi traktuje ukąszenia kleszczy jako uciążliwość, ale niektóre kleszcze przenoszą Babesia microti, mikroskopijny pasożyt, który po cichu atakuje czerwone krwinki. U osób zdrowych może wywołać objawy grypopodobne; u osób wrażliwych, zwłaszcza otrzymujących transfuzje krwi, może być zagrożeniem życia. Wczesne wykrycie tego pasożyta jest trudne, ponieważ często występuje w bardzo niskim stężeniu we krwi. W badaniu opisano nowy szybki test, który ma na celu wykrywać B. microti szybko, dokładnie, a nawet poza zaawansowanymi laboratoriami, pomagając chronić zarówno pacjentów, jak i zapasy krwi.

Ukryta infekcja we krwi

Babesioza, choroba wywoływana przez pasożyty z rodzaju Babesia, staje się rosnącym problemem w kilku częściach świata, w tym w Chinach i Stanach Zjednoczonych. Kleszcze przenoszą pasożyta ze zwierząt dzikich i domowych na ludzi, gdzie ukrywa się on wewnątrz czerwonych krwinek. Wczesne objawy, takie jak gorączka, zmęczenie i anemia, łatwo mogą być pomylone z malarią lub innymi częstymi zakażeniami. Ponieważ pasożyt może krążyć na niezwykle niskich poziomach, standardowa mikroskopia rozmazu krwi, a nawet niektóre testy molekularne, często nie wykrywają wczesnych lub łagodnych infekcji. To szczególnie niepokojące dla banków krwi, ponieważ pozornie zdrowi dawcy mogą nieświadomie przekazać pasożyta biorcom transfuzji.

Szybszy sposób wykrywania pasożyta

Naukowcy skupili się na technice zwanej amplifikacją z udziałem rekombinazy (RPA), która może kopiować wybrane fragmenty DNA w stałej, łagodnej temperaturze. W przeciwieństwie do konwencjonalnego PCR, który wymaga precyzyjnych cykli ogrzewania i chłodzenia oraz specjalistycznych urządzeń, RPA może działać w przybliżeniu w temperaturze ciała w około 20 minut, co czyni ją obiecującą do zastosowań w przychodniach lub w terenie. Zespół zaprojektował odczynniki RPA celujące w wysoce zachowany region genetyczny B. microti znany jako 18S rRNA, starannie przebadał i zoptymalizował sekwencje starterów i sond, aby zapewnić rozpoznawanie B. microti, a nie organizmów spokrewnionych, takich jak pierwotniaki malarii.

Czułość, swoistość i szybkość testu

Po skonstruowaniu testu naukowcy postawili trzy kluczowe pytania: jak małą ilość DNA pasożyta potrafi wykryć, czy myli B. microti z innymi mikroorganizmami i jak sprawdza się w rzeczywistych próbkach krwi? W laboratorium fluorescencyjny test RPA niezawodnie wykrywał już 1 femtogram DNA B. microti na mikrolitr — co mniej więcej odpowiada kilkunastu pasożytom w mililitrze krwi — i działał optymalnie w 39 °C w zaledwie 20 minut. W porównaniu ze standardową metodą PCR zagnieżdżonym, nowy test był około dziesięć razy bardziej czuły dla oczyszczonego DNA i w przybliżeniu 600 razy bardziej czuły przy rozcieńczeniach zakażonej krwi mysiej, wykrywając aż 0,046 pasożyta na mikrolitr, znacznie poniżej wykrywalności wielu istniejących metod klinicznych.

Od myszy i pacjentów do klinik w praktyce

Zespół przeszedł następnie poza oczyszczone DNA. W kontrolowanym modelu myszy śledzili przebieg zakażeń w czasie i porównali trzy podejścia: tradycyjną mikroskopię, PCR zagnieżdżony i nowy test RPA. Mikroskopia nie wykryła pasożyta do 15. dnia po zakażeniu, PCR zagnieżdżony stał się pozytywny u niektórych zwierząt już w 9. dniu, a RPA wykrywał zakażenia u większej liczby zwierząt wcześniej, przy czym wszystkie myszy testowały pozytywnie do 12. dnia. Test poprawnie zidentyfikował także dwa potwierdzone ludzkie przypadki babesiozy. Na koniec badacze zastosowali test u 119 osób w prowincji Henan w Chinach, które miały gorączkę i małą liczbę płytek krwi — objawy mogące wynikać z kilku chorób przenoszonych przez kleszcze. RPA wykryło B. microti u 21 pacjentów, podczas gdy PCR zagnieżdżony u 20; analiza statystyczna wykazała dużą zgodność obu metod, ale RPA uchwyciło jeden dodatkowy przypadek pozytywny. Badanie ujawniło również, że wielu pacjentów było jednocześnie nosicielami B. microti i bunyawirusa, co podkreśla, jak współzakażenia komplikują diagnostykę.

Co to oznacza dla pacjentów i bezpieczeństwa krwi

Dla osoby niebędącej specjalistą główne przesłanie jest proste: ten fluorescencyjny test RPA oferuje szybki, przenośny i bardzo czuły sposób wykrywania niebezpiecznego pasożyta przenoszonego przez kleszcze we krwi. Dzięki wykrywaniu B. microti na poziomach znacznie niższych niż te widoczne w mikroskopii i w wielu standardowych testach, może pomóc klinicystom w wcześniejszym rozpoznawaniu pacjentów, prowadzić do odpowiedniego leczenia zamiast mylącego rozpoznania jako malaria oraz wzmocnić przesiewy tam, gdzie pasożyt zagraża zapasom krwi. Chociaż przed szerokim wdrożeniem pozostają wyzwania praktyczne, badanie pokazuje, że proste testy DNA gotowe do użycia w terenie mogą odegrać istotną rolę w ochronie zdrowia publicznego przed pojawiającymi się chorobami przenoszonymi przez kleszcze.

Cytowanie: Cai, Y., Yang, H.Y., Qiang, K. et al. Development and field evaluation of a rapid detection method for Babesia microti using fluorescent recombinase polymerase amplification(RPA) technology. Sci Rep 16, 14188 (2026). https://doi.org/10.1038/s41598-026-42288-3

Słowa kluczowe: babesioza, choroba przenoszona przez kleszcze, bezpieczeństwo transfuzji krwi, szybkie testy DNA, Babesia microti