Разработка и полевое оценивание быстрого метода обнаружения Babesia microti с использованием флуоресцентной технологии рекомбиназной полимеразной амплификации (RPA)

Почему важен скрытый паразит клещей

Многие воспринимают укусы клещей как досадную неприятность, но некоторые клещи переносят Babesia microti — микроскопического паразита, который незаметно внедряется в эритроциты. У здоровых людей он может вызывать симптомы, похожие на грипп; у уязвимых пациентов, особенно получающих переливание крови, инфекция может быть опасной для жизни. Раннее выявление этого паразита затруднено, поскольку он часто присутствует в крови на очень низких уровнях. В этом исследовании описан новый быстрый тест, который направлен на быстрое и точное обнаружение B. microti даже вне специализированных лабораторий, что помогает защищать пациентов и запасы крови.

Скрытая инфекция в крови

Бабезиоз, заболевание, вызванное паразитами рода Babesia, становится все более актуальной проблемой в ряде регионов мира, включая Китай и США. Клещи передают паразита от диких и домашних животных человеку, где он прячется внутри эритроцитов. Ранние симптомы — лихорадка, слабость и анемия — легко принимают за малярию или другие распространенные инфекции. Поскольку паразит может циркулировать на чрезвычайно низких уровнях, стандартная микроскопия мазков крови или даже некоторые молекулярные методы часто пропускают ранние или слабые инфекции. Это особенно тревожно для служб переливания крови, так как внешне здоровые доноры могут бессимптомно передать паразита реципиентам при трансфузии.

Быстрее способ обнаружить паразита

Исследователи сосредоточились на методе, называемом рекомбиназной полимеразной амплификацией (RPA), который способен копировать определённые фрагменты ДНК при постоянной, умеренной температуре. В отличие от традиционной ПЦР, требующей точных циклов нагрева и охлаждения и специального оборудования, RPA может работать при примерно температуре тела примерно за 20 минут, что делает его перспективным для клиник и полевых условий. Команда разработала реагенты RPA, нацеленные на сильно консервативный генетический участок B. microti, известный как 18S рРНК, и тщательно отобрала и оптимизировала праймеры и зонды, чтобы они распознавали B. microti, но не родственныe организмы, такие как паразиты малярии.

Чувствительность, специфичность и скорость теста

После создания анализа учёные задали три ключевых вопроса: какое минимальное количество ДНК паразита он может обнаружить, путает ли он B. microti с другими микроорганизмами и как он работает на реальных образцах крови? В лабораторных условиях флуоресцентный RPA‑тест надежно обнаруживал всего 1 фемтограмм ДНК B. microti на микролитр — что примерно соответствует нескольким паразитам в миллилитре крови — и работал оптимально при 39 °C всего за 20 минут. При сравнении со стандартным методом вложенной ПЦР новый тест оказался примерно в десять раз чувствительнее для чистой ДНК и примерно в 600 раз чувствительнее при разведении инфицированной крови мышей, обнаруживая до 0,046 паразита на микролитр — значительно ниже порога многих существующих клинических методов.

От мышей и пациентов к реальным клиникам

Затем команда перешла от очищенной ДНК к моделям инфекции. В контролируемой модели у мышей они наблюдали течение инфекции и сравнивали три подхода: традиционную микроскопию, вложенную ПЦР и новый RPA‑тест. Микроскопия не выявляла паразита до 15‑го дня после заражения, вложенная ПЦР давала положительный результат у некоторых особей к 9‑му дню, а RPA выявлял инфекции у большего числа животных раньше — все мыши дали положительный результат к 12‑му дню. Тест также правильно идентифицировал два подтвержденных случая бабезиоза у людей. Наконец, исследователи применили тест к 119 пациентам в провинции Хэнань в Китае, у которых были лихорадка и низкий уровень тромбоцитов — симптомы, которые могут вызывать несколько заболеваний, переносимых клещами. RPA обнаружил B. microti у 21 пациента, тогда как вложенная ПЦР — у 20; статистический анализ показал тесное согласие между методами, но RPA выявил ещё один дополнительный положительный случай. Исследование также показало, что многие пациенты имели одновременно B. microti и буньявирусную инфекцию, что подчёркивает, как ко‑инфекции усложняют диагностику.

Что это значит для пациентов и безопасности крови

Для неспециалиста главный вывод ясен: этот флуоресцентный RPA‑тест предлагает быстрый, переносной и высокочувствительный способ обнаружения опасного паразита, передаваемого клещами, в крови. Обнаруживая B. microti на уровнях, значительно ниже порога видимости для микроскопии и многих стандартных тестов, он может помочь врачам ставить диагноз раньше, направлять адекватное лечение вместо путаницы с малярией и усилить скрининг в районах, где паразит представляет угрозу донорской крови. Хотя практические вопросы остаются перед широким внедрением, исследование демонстрирует, что простые полевые ДНК‑тесты могут сыграть важную роль в защите общественного здоровья от возникающих инфекций, переносимых клещами.

Цитирование: Cai, Y., Yang, H.Y., Qiang, K. et al. Development and field evaluation of a rapid detection method for Babesia microti using fluorescent recombinase polymerase amplification(RPA) technology. Sci Rep 16, 14188 (2026). https://doi.org/10.1038/s41598-026-42288-3

Ключевые слова: бабезиоз, болезнь, передаваемая клещами, безопасность переливания крови, быстрый ДНК‑тест, Babesia microti