Azelastin ve Losartanın Spike Edilmiş İnsan Plazma Örneklerinde Eşzamanlı Tayini için Yeşil DOE Tabanlı RP‑HPLC Yöntemi

Bu araştırma neden önemli

Birçok kişi yüksek tansiyon gibi kalp‑ilaçlı durumlar ile alerjik hastalıkları birlikte yaşamaktadır. Bu durumlarda sıkça kullanılan iki ilaç, bir alerji ilacı olan azelastin ve kan basıncını düşürmenin yanı sıra damarları koruyan losartandır. Doktorlar ve araştırmacılar, hem tedaviyi ince ayarlamak hem de yeni kombinasyon tedavilerini araştırmak için bu ilaçların hastanın kanındaki miktarını güvenilir biçimde ölçebilmeye ihtiyaç duyar. Bu çalışma, her iki ilacı aynı anda insan kan plazmasında ölçebilen, yüksek duyarlılığa sahip bir laboratuvar testi sunarken kimyasal atıkları azaltıp süreci çevre dostu hâle getirmektedir.

İki ilaç, ortak bir sağlık sorunu

Kronik düşük dereceli enflamasyon ve damar iç yüzeyine zarar, diyabet, yüksek tansiyon ve alerjik hastalıklar da dahil olmak üzere birçok modern hastalığın merkezinde yer alır. Bağışıklık hücrelerinden salınan histamin alerjik semptomlara katkıda bulunur ve damar hastalığını da teşvik edebilir. Azelastin, bu bağışıklık hücrelerini stabilize ederek ve histaminin etkisini bloke ederek alerji semptomlarını hafifletmeye yardımcı olur. Losartanın aslen kan basıncını düşürmek için geliştirilmiş olmasına karşın kalp ve damarlar üzerindeki yükü azaltır, ayrıca enflamasyon ve trombosit aktivitesini de baskılar. Hayvan çalışmalarına göre bu iki ilacın birlikte kullanımı, tek başına kullanıma kıyasla damar fonksiyonunu ve kan şekeri düzeylerini daha fazla iyileştirebilir; bu da ikiliyi gelecek kombinasyon tedavileri için çekici kılar.

Kandaki ilaçları izlemenin zorluğu

Bu ilaç kombinasyonunu insanlar üzerinde güvenle test etmek ve kullanmak için bilim insanlarının az miktarlardaki azelastin ve losartini kan örneklerinde ölçebilmeleri gerekir. Geleneksel analitik yöntemler genellikle tek bir ilaca odaklanır, çok sayıda deneme‑yanılma ayarı gerektirir ve maliyetli, çevreye zararlı büyük hacimlerde organik çözücü kullanır. Yazarlar, insan plazmasında her iki ilacı yüksek doğruluk ve hassasiyetle ayırıp ölçebilen tek, sade bir test tasarlamayı ve bunu zaman, çözücü ve enerji tasarrufu sağlayacak şekilde gerçekleştirmeyi amaçladılar.

Testi kurmanın daha akıllı yolu

Yöntemi yalnızca sezgiyle ayarlamak yerine araştırmacılar yapılandırılmış bir “deney tasarımı” stratejisi kullandılar. Öncelikle çözücü türü, akış hızı, sıcaklık ve çözeltinin asitliği gibi birçok olası deneysel faktörü keşfettiler; ardından performans üzerinde en büyük etkiye sahip üç faktörü belirlediler: metanol yüzdesi, asetonitril yüzdesi ve su bazlı tamponun asitliği. Sonra bu üç faktörün farklı kombinasyonlarını yalnızca 20 dikkatle seçilmiş deneyde test etmek için merkezi kompozit tasarım adını taşıyan istatistiksel bir tasarım uyguladılar. Her ayarın tepe şekli, iki ilaç arasındaki ayrışma, ölçüm sinyali ve toplam çalışma süresi üzerindeki etkisini analiz ederek optimal koşulları gösteren matematiksel modeller kurdular.

Yeşil testin pratikte nasıl çalıştığı

Nihai koşullar altında metanol, az miktarda asetonitril ve hafif asidik bir fosfat tampon karışımı, ilaçları bir kromatografi kolonu boyunca taşır; burada ilaçlar zamana göre ayrışır ve duyarlı bir floresans detektörüne ulaşmadan önce ayrı zirveler oluşturur. Bu düzen, azelastin ve losartan için yaklaşık 14 dakika içinde keskin, iyi ayrımsallaşmış sinyaller üretir. Yöntem, terapötik ilaç izlemesi için uygun olacak şekilde insan plazmasında her iki ilacın da son derece düşük konsantrasyonlarını güvenilir biçimde ölçebilir. Doğrulama çalışmaları, mükemmele yakın bir doğrusal ilişki, doğruluk, tekrarlanabilirlik ve dayanıklılık gösterdi; bu da küçük günlük değişimlerin performansı etkilemediğini belirtir. Önemli olarak, verimli deneysel tasarım, yöntemi geliştirmek ve çalıştırmak için gereken deneme sayısını ve çözücü hacmini azalttı.

Çevreyi göz önünde bulundurarak performansı ölçmek

Yaklaşımlarının ne kadar çevre dostu olduğunu değerlendirmek için yazarlar, çözücü toksisitesi, atık üretimi, enerji kullanımı ve genel sürdürülebilirlik gibi faktörleri puanlayan Complex MoGAPI ve AGREE adlı iki modern değerlendirme aracını uyguladılar. Yeni yöntem, yapılandırılmış deney tasarımı kullanmayan geleneksel yüksek performanslı sıvı kromatografisi yaklaşımlarından daha iyi puan aldı; bu, azaltılmış çözücü kullanımı ve daha az optimizasyon denemesiyle uyumludur. Maliyet, uygulanabilirlik ve günlük kullanılabilirlik gibi ek araçlar ise yöntemin yalnızca yeşil olmadığını, aynı zamanda rutin laboratuvar çalışmaları için yeterince basit ve ekonomik olduğunu gösterdi.

Hastalar ve laboratuvarlar için anlamı

Basitçe ifade etmek gerekirse, çalışma insan kanında iki önemli kardiyovasküler ve alerji ilacını daha az zaman, daha az çözücü ve daha az kaynak kullanarak doğru biçimde izleyebilen bir laboratuvar testi sunmaktadır. Böyle bir yöntem azelastin ve losartan kombinasyonlarının klinik çalışmalarını destekleyebilir, hastanede tedavi gören hastaların tedavisini izlemeye yardımcı olabilir ve daha yeşil analitik uygulamaların yaygınlaşmasını teşvik edebilir. Akıllı deney planlamasını çevresel farkındalıkla birleştirerek, çalışma laboratuvarların daha iyi veri elde ederken ekolojik ayak izlerini nasıl azaltabileceklerini göstermektedir.

Atıf: Roshdy, A., Belal, F. & Marie, A.A. Green DOE based RP-HPLC method for the simultaneous determination of Azelastine and Losartan in spiked human plasma samples. Sci Rep 16, 8263 (2026). https://doi.org/10.1038/s41598-026-39426-2

Anahtar kelimeler: terapötik ilaç izleme, azelastin ve losartan, yeşil analitik kimya, kan plazması analizi, yüksek performanslı sıvı kromatografisi