Método RP-HPLC baseado em DOE verde para a determinação simultânea de Azelastina e Losartana em amostras de plasma humano fortificadas

Por que esta pesquisa é importante

Muitas pessoas convivem simultaneamente com doenças cardíacas, como hipertensão, e com doenças alérgicas. Dois medicamentos frequentemente usados nessas situações são a azelastina, um antialérgico, e a losartana, um fármaco para pressão arterial que também protege os vasos sanguíneos. Médicos e pesquisadores precisam de métodos confiáveis para medir quanto desses fármacos está presente no sangue do paciente, tanto para ajustar o tratamento quanto para estudar novas terapias combinadas. Este estudo apresenta um ensaio laboratorial altamente sensível que pode quantificar ambos os medicamentos ao mesmo tempo no plasma humano, reduzindo o desperdício químico e tornando o processo mais ambientalmente amigável.

Dois medicamentos, um problema de saúde compartilhado

Inflamação crônica de baixo grau e danos ao revestimento interno dos vasos sanguíneos estão no cerne de muitas doenças modernas, incluindo diabetes, hipertensão e doenças alérgicas. A histamina liberada por células do sistema imune contribui para os sintomas alérgicos e pode também favorecer doenças arteriais. A azelastina atua estabilizando essas células imunes e bloqueando os efeitos da histamina, aliviando os sintomas alérgicos. A losartana, originalmente desenvolvida para reduzir a pressão arterial, diminui a sobrecarga no coração e nos vasos e também atenua a inflamação e a atividade plaquetária. Estudos em animais sugerem que o uso combinado desses dois fármacos pode melhorar a função vascular e os níveis de glicemia mais do que cada fármaco isoladamente, tornando a combinação uma opção atraente para futuras terapias combinadas.

O desafio de rastrear medicamentos no sangue

Para testar e usar essa combinação de medicamentos com segurança em humanos, os cientistas precisam ser capazes de medir quantidades muito pequenas de azelastina e losartana em amostras sanguíneas. Métodos analíticos tradicionais costumam focar em um único fármaco, exigem muitos ajustes por tentativa e erro e usam grandes volumes de solventes orgânicos que são caros e nocivos ao meio ambiente. Os autores propuseram projetar um único ensaio simplificado que pudesse separar e quantificar ambos os fármacos no plasma humano com alta exatidão e precisão, e fazê‑lo de forma a economizar tempo, solvente e energia.

Uma forma mais inteligente de construir o ensaio

Em vez de ajustar o método apenas por intuição, os pesquisadores usaram uma estratégia estruturada de “design de experimentos” (DOE). Primeiro exploraram muitos fatores experimentais possíveis, como tipo de solvente, taxa de fluxo, temperatura e acidez da solução, e então identificaram três que tinham maior impacto no desempenho: a porcentagem de metanol, a porcentagem de acetonitrila e a acidez do tampão aquoso. Em seguida aplicaram um desenho estatístico chamado central composite design para testar diferentes combinações desses três fatores em apenas 20 experimentos cuidadosamente escolhidos. Ao analisar como cada condição afetava a forma do pico, a separação entre os dois fármacos, o sinal de medição e o tempo total de execução, eles construíram modelos matemáticos que apontaram as condições ótimas.

Como o ensaio verde funciona na prática

Sob as condições finais, uma mistura de metanol, uma pequena quantidade de acetonitrila e um tampão fosfato levemente ácido transporta os fármacos por uma coluna de cromatografia, onde se separam no tempo antes de alcançarem um detector de fluorescência sensível. Essa configuração produz sinais nítidos e bem resolvidos para azelastina e losartana em cerca de 14 minutos. O método consegue quantificar de forma confiável concentrações extremamente baixas de cada fármaco no plasma humano, sendo adequado para monitoramento terapêutico de medicamentos. A validação mostrou excelente linearidade, exatidão, repetibilidade e robustez, o que significa que pequenas variações dia a dia não comprometem seu desempenho. Importante: o desenho experimental eficiente reduziu o número de ensaios e o volume de solvente necessário para desenvolver e executar o método.

Medição do desempenho com foco ambiental

Para avaliar quão ambientalmente amigável era sua abordagem, os autores aplicaram duas ferramentas modernas de avaliação, Complex MoGAPI e AGREE, que pontuam métodos analíticos segundo fatores como toxicidade dos solventes, geração de resíduos, consumo de energia e sustentabilidade geral. O novo método obteve pontuação superior às abordagens convencionais de cromatografia líquida de alta eficiência que não utilizam desenho experimental estruturado, refletindo seu menor uso de solventes e o reduzido número de execuções de otimização. Ferramentas adicionais que avaliam custo, praticidade e usabilidade cotidiana indicaram que o método é não só mais verde, mas também simples e acessível o suficiente para uso rotineiro em laboratório.

O que isso significa para pacientes e laboratórios

Em termos práticos, o estudo entrega um ensaio laboratorial capaz de monitorar com precisão dois importantes medicamentos cardiovasculares e antialérgicos no sangue humano usando menos tempo, menos solvente e menos recursos. Tal método pode apoiar estudos clínicos sobre combinações de azelastina e losartana, ajudar médicos a monitorar tratamentos em pacientes hospitalizados e incentivar a adoção mais ampla de práticas analíticas mais verdes. Ao unir planejamento experimental inteligente com consciência ambiental, o trabalho demonstra como os laboratórios podem obter dados melhores ao mesmo tempo em que reduzem sua pegada ecológica.

Citação: Roshdy, A., Belal, F. & Marie, A.A. Green DOE based RP-HPLC method for the simultaneous determination of Azelastine and Losartan in spiked human plasma samples. Sci Rep 16, 8263 (2026). https://doi.org/10.1038/s41598-026-39426-2

Palavras-chave: monitoramento terapêutico de medicamentos, azelastina e losartana, química analítica verde, análise de plasma sanguíneo