Metodo RP-HPLC basato su DOE green per la determinazione simultanea di Azelastina e Losartan in campioni di plasma umano arricchiti

Perché questa ricerca è importante

Molte persone convivono sia con patologie cardiache, come l’ipertensione, sia con malattie allergiche. Due farmaci impiegati frequentemente in questi contesti sono l’azelastina, un antiallergico, e il losartan, un antipertensivo che protegge anche i vasi sanguigni. Medici e ricercatori hanno bisogno di metodi affidabili per misurare la concentrazione di questi farmaci nel sangue dei pazienti, sia per ottimizzare le terapie sia per studiare nuove combinazioni terapeutiche. Questo studio presenta un test di laboratorio altamente sensibile che misura contemporaneamente entrambi i farmaci nel plasma umano, riducendo al contempo i rifiuti chimici e rendendo il processo più rispettoso dell’ambiente.

Due farmaci, un problema di salute condiviso

Infiammazione cronica di basso grado e danno all’endotelio vascolare sono alla base di molte malattie moderne, incluse il diabete, l’ipertensione e le patologie allergiche. L’istamina rilasciata dalle cellule immunitarie contribuisce ai sintomi allergici e può anche favorire le malattie arteriose. L’azelastina agisce stabilizzando queste cellule immunitarie e bloccando gli effetti dell’istamina, alleviando i sintomi delle allergie. Il losartan, originariamente sviluppato per abbassare la pressione arteriosa, riduce lo sforzo su cuore e vasi e attenua inoltre l’infiammazione e l’attività piastrinica. Studi su modelli animali suggeriscono che l’uso combinato di questi due farmaci possa migliorare la funzione vascolare e i livelli glicemici più di ciascun farmaco da solo, rendendo la coppia un’opzione interessante per future terapie combinate.

La sfida di monitorare i farmaci nel sangue

Per testare e utilizzare in sicurezza questa combinazione farmacologica nell’uomo, gli scienziati devono poter misurare quantità molto basse di azelastina e losartan nei campioni di sangue. I metodi analitici tradizionali spesso si concentrano su un singolo farmaco, richiedono numerosi aggiustamenti sperimentali e impiegano grandi volumi di solventi organici, costosi e dannosi per l’ambiente. Gli autori si sono posti l’obiettivo di progettare un unico test snello in grado di separare e quantificare entrambi i farmaci nel plasma umano con elevata accuratezza e precisione, facendo inoltre risparmiare tempo, solvente ed energia.

Un modo più intelligente di costruire il test

Invece di ottimizzare il metodo basandosi solo sull’intuizione, i ricercatori hanno impiegato una strategia strutturata di “design of experiments” (progettazione sperimentale). Hanno inizialmente esplorato molti fattori sperimentali possibili, come il tipo di solvente, la velocità di flusso, la temperatura e l’acidità della soluzione, quindi hanno identificato tre fattori con il maggior impatto sulle prestazioni: la percentuale di metanolo, la percentuale di acetonitrile e l’acidità del buffer acquoso. Hanno poi applicato un disegno statistico chiamato central composite design per testare diverse combinazioni di questi tre fattori in sole 20 esperienze accuratamente selezionate. Analizzando come ciascuna impostazione influenzasse la forma dei picchi, la separazione tra i due farmaci, il segnale di misura e il tempo totale di analisi, hanno costruito modelli matematici che indicavano le condizioni ottimali.

Come funziona il test “green” in pratica

Alle condizioni finali, una miscela di metanolo, una piccola quantità di acetonitrile e un buffer fosfato lievemente acido trasporta i farmaci attraverso una colonna cromatografica, dove si separano nel tempo prima di raggiungere un rivelatore a fluorescenza sensibile. Questa configurazione produce segnali netti e ben risolti per azelastina e losartan in circa 14 minuti. Il metodo è in grado di misurare in modo affidabile concentrazioni estremamente basse di ciascun farmaco nel plasma umano, rendendolo adatto al monitoraggio terapeutico. La validazione ha mostrato eccellente linearità, accuratezza, ripetibilità e robustezza, il che significa che piccole variazioni giornaliere non compromettono le prestazioni. Importante è che il disegno sperimentale efficiente ha ridotto il numero di prove e il volume di solvente necessario per sviluppare e utilizzare il metodo.

Valutare le prestazioni con l’ambiente in mente

Per giudicare quanto fosse ecocompatibile l’approccio, gli autori hanno applicato due strumenti di valutazione moderni, Complex MoGAPI e AGREE, che valutano i metodi analitici su fattori come la tossicità dei solventi, la generazione di rifiuti, il consumo energetico e la sostenibilità complessiva. Il nuovo metodo ha ottenuto punteggi migliori rispetto agli approcci cromatografici convenzionali che non utilizzano un disegno sperimentale strutturato, riflettendo un uso ridotto di solventi e un minore numero di esperimenti di ottimizzazione. Strumenti aggiuntivi che valutano costo, praticità e usabilità quotidiana hanno indicato che il metodo non è solo “green” ma anche sufficientemente semplice e conveniente per il lavoro di routine in laboratorio.

Cosa significa per pazienti e laboratori

In termini semplici, lo studio offre un test di laboratorio che può monitorare con precisione due importanti farmaci cardiovascolari e antiallergici nel sangue umano usando meno tempo, meno solvente e meno risorse. Un metodo del genere può supportare studi clinici sulle combinazioni azelastina–losartan, aiutare i medici a monitorare la terapia nei pazienti ricoverati e favorire un’adozione più ampia di pratiche analitiche più ecologiche. Unendo una pianificazione sperimentale intelligente a una consapevolezza ambientale, il lavoro illustra come i laboratori possano ottenere dati migliori riducendo al contempo la loro impronta ecologica.

Citazione: Roshdy, A., Belal, F. & Marie, A.A. Green DOE based RP-HPLC method for the simultaneous determination of Azelastine and Losartan in spiked human plasma samples. Sci Rep 16, 8263 (2026). https://doi.org/10.1038/s41598-026-39426-2

Parole chiave: monitoraggio terapeutico dei farmaci, azelastina e losartan, chimica analitica verde, analisi del plasma sanguigno, cromatografia liquida ad alte prestazioni