Método RP‑HPLC basado en DOE ecológico para la determinación simultánea de azelastina y losartán en muestras de plasma humano fortificadas

Por qué importa esta investigación

Mucha gente convive tanto con problemas cardíacos, como la hipertensión, como con enfermedades alérgicas. Dos medicamentos usados con frecuencia en estas situaciones son la azelastina, un fármaco antialérgico, y el losartán, un antihipertensivo que además protege los vasos sanguíneos. Los médicos e investigadores necesitan métodos fiables para medir cuánto de estos fármacos hay en la sangre de un paciente, tanto para ajustar el tratamiento como para estudiar nuevas terapias combinadas. Este estudio presenta una prueba de laboratorio muy sensible que puede medir ambos fármacos a la vez en plasma humano, reduciendo además los residuos químicos y haciendo el proceso más respetuoso con el medio ambiente.

Dos fármacos, un problema de salud compartido

La inflamación crónica de bajo grado y el daño del revestimiento interno de los vasos sanguíneos están en el origen de muchas enfermedades contemporáneas, incluidas la diabetes, la hipertensión y las enfermedades alérgicas. La histamina liberada por las células inmunitarias contribuye a los síntomas alérgicos y puede también favorecer la enfermedad arterial. La azelastina actúa estabilizando estas células inmunitarias y bloqueando los efectos de la histamina, aliviando los síntomas alérgicos. El losartán, desarrollado inicialmente para reducir la presión arterial, disminuye la carga sobre el corazón y los vasos y también atenúa la inflamación y la actividad plaquetaria. Estudios en animales sugieren que usar ambos fármacos juntos puede mejorar la función vascular y los niveles de glucosa en sangre más que cada fármaco por separado, lo que hace atractiva la combinación para futuras terapias conjuntas.

El reto de seguir los fármacos en la sangre

Para probar y usar con seguridad esta combinación en personas, los científicos deben poder medir cantidades muy pequeñas de azelastina y losartán en muestras sanguíneas. Los métodos analíticos tradicionales suelen centrarse en un solo fármaco, requieren muchos ajustes por prueba y error y emplean grandes volúmenes de disolventes orgánicos que son costosos y dañinos para el medio ambiente. Los autores se propusieron diseñar una única prueba simplificada que pudiera separar y cuantificar ambos fármacos en plasma humano con alta precisión y exactitud, y hacerlo de forma que ahorre tiempo, disolvente y energía.

Una forma más inteligente de diseñar la prueba

En lugar de ajustar el método solo por intuición, los investigadores usaron una estrategia estructurada de “diseño de experimentos” (DOE). Primero exploraron muchos factores experimentales posibles, como el tipo de disolvente, la velocidad de flujo, la temperatura y la acidez de la solución, e identificaron tres que tenían el mayor impacto en el rendimiento: el porcentaje de metanol, el porcentaje de acetonitrilo y la acidez del tampón acuoso. Aplicaron entonces un diseño estadístico llamado diseño compuesto central para probar diferentes combinaciones de estos tres factores en solo 20 experimentos cuidadosamente elegidos. Al analizar cómo cada ajuste afectaba la forma de los picos, la separación entre los dos fármacos, la señal de medición y el tiempo total de análisis, construyeron modelos matemáticos que señalaron las condiciones óptimas.

Cómo funciona la prueba ecológica en la práctica

Bajo las condiciones finales, una mezcla de metanol, una pequeña cantidad de acetonitrilo y un tampón fosfato ligeramente ácido transporta los fármacos a través de una columna cromatográfica, donde se separan en el tiempo antes de alcanzar un detector de fluorescencia sensible. Esta configuración genera señales nítidas y bien resueltas para azelastina y losartán en aproximadamente 14 minutos. El método puede medir de forma fiable concentraciones extremadamente bajas de cada fármaco en plasma humano, lo que lo hace adecuado para la monitorización terapéutica. La validación mostró excelente linealidad, exactitud, repetibilidad y robustez, lo que significa que pequeñas variaciones día a día no perjudican su rendimiento. Es importante que el diseño experimental eficiente redujo el número de ensayos y el volumen de disolvente necesarios para desarrollar y ejecutar el método.

Medir el rendimiento con la mirada puesta en el medio ambiente

Para evaluar cuán respetuoso con el medio ambiente era su enfoque, los autores aplicaron dos herramientas de evaluación modernas, Complex MoGAPI y AGREE, que puntúan los métodos analíticos en factores como la toxicidad de los disolventes, la generación de residuos, el uso de energía y la sostenibilidad global. El nuevo método obtuvo mejores puntuaciones que los enfoques convencionales de cromatografía líquida de alta resolución que no emplean diseño experimental estructurado, reflejando su menor uso de disolventes y el menor número de optimizaciones. Herramientas adicionales que valoran el coste, la practicidad y la usabilidad cotidiana indicaron que el método no solo es verde, sino también lo bastante sencillo y asequible para el trabajo rutinario de laboratorio.

Qué significa esto para pacientes y laboratorios

En términos sencillos, el estudio ofrece una prueba de laboratorio que puede rastrear con precisión dos medicamentos importantes para la cardiología y las alergias en sangre humana usando menos tiempo, menos disolventes y menos recursos. Dicho método puede apoyar estudios clínicos sobre combinaciones de azelastina y losartán, ayudar a los médicos a monitorizar tratamientos en pacientes hospitalizados e incentivar una adopción más amplia de prácticas analíticas más sostenibles. Al unir una planificación experimental inteligente con conciencia ambiental, el trabajo ilustra cómo los laboratorios pueden obtener mejores datos mientras reducen su huella ecológica.

Cita: Roshdy, A., Belal, F. & Marie, A.A. Green DOE based RP-HPLC method for the simultaneous determination of Azelastine and Losartan in spiked human plasma samples. Sci Rep 16, 8263 (2026). https://doi.org/10.1038/s41598-026-39426-2

Palabras clave: monitorización terapéutica de fármacos, azelastina y losartán, química analítica verde, análisis de plasma sanguíneo, cromatografía líquida de alta resolución